一、了解CAR-T细胞产品

　　质粒载体的制备：从工作种子库中取一支或者几支菌种，复苏后逐级扩大培养后进行质粒提取，经纯化及除菌过滤后成为无菌质粒载体。

　　病毒载体的制备：从工作细胞库中取出一支或者几支冻存细胞，复苏合并后在适当的培养设备中逐级扩大培养，再加入适当比例的质粒载体转染细胞后继续进行培养，收获培养上清液并进行纯化、浓缩及除菌过滤后成为无菌病毒载体悬液。

　　CAR-T细胞的制备：将采集的细胞进行单核细胞的分离，再进行T细胞的分选、活化和转染，最后进行CAR-T细胞的扩增、收集、洗涤及制剂。

　　二、CAR-T细胞实验室设计原则

　　厂房工艺布局按生产过程和操作程序，做到各行其道、快捷通畅，避免物料迂回穿梭、人员穿岗，最大限度地减少差错和交叉污染。

　　三、走道形式

　　质粒载体制备和病毒载体的制备车间（实验室）：均为常规细菌发酵和细胞培养车间，可设计为单走道形式。

　　CAR-T细胞制备车间（实验室）：操作人员和物品从洁净走廊进入CAR-T细胞的制备单元，操作完成后，人员和物品退出到污物走廊，人员从退更房间退出，废弃物通过废弃物专用设施退出，成品通过成品专用设施退出。

　　四、设计重点（环境要求）

　　质粒载体和病毒载体可在生产终端除菌过滤，因此发酵区和健康细胞区可以在D级环境下生产(发酵罐系统)，纯化区和病毒区需要在C级环境下生产，质粒和病毒的终产品都是无菌的，因此最后的除菌过滤和灌装需要在C+ISOLATOR或者B+A的环境下进行。

　　CAR-T细胞的制备全过程均不可除菌过滤，每个制备单元需要设计独立的B级净化空调，每个制备单元制备完一人份后需要对空调系统进行彻底消毒后才能进行下一人份的生产，为了提高制备单元的利用率，空调系统需要设置2种模式：生产模式和消毒模式，生产模式是回风运行，消毒模式是全排风，迅速排出消毒气体，缩短消毒时间。洁净走道、污物走道以及其他辅助房间设计为C级，与每个制备单元通过气闸连接，可以降低生产运行成本。